나무의사 수목병 및 병원체 진단방법

[11회 기출]- 병리학

4. 수목 병 및 병원체 진단에 관한 설명으로 옳지 않은 것은?

① 습식 처리법은 곰팡이 감염이 의심될 때 주로 사용한다.

② 광학현미경으로 바이러스 감염에 의한 봉입체를 관찰할 수 있다.

③ 곰팡이에 의한 병 중에도 '코흐의 원칙'을 적용할 수 없는 경우가 있다.

④ 면역학적 진단을 하려면 대상 병원체에 대한 항혈청을 가지고 있어야 한다.

⑤ 썩고 있는 뿌리를 DAPI로 염색하여 형광현미경으로 관찰하면 감염 여부를 알 수 있다.

육안 진단
- 외부 병징: 모자이크, 위축, 오갈병(잎 쭈글쭈글) 등 관찰
- 내부 병징: 줄기 절단 후 도관, 조직의 변색 확인 (주로 세균, 곰팡이)
- 병원체 징후:
  - 균총(Colony): 세균 집락
  - 자실체(Fruiting body): 곰팡이의 버섯 같은 번식 기관
  - 포자(Spore): 곰팡이의 번식체
  - ※ 바이러스는 봉합체(Inclusion body)를 형성하나 현미경 관찰 필요
현미경 진단
- 해부현미경: 곰팡이, 선충 관찰
- 광학현미경: 세균, 곰팡이, 파이토플라스마 관찰
- 형광현미경: 파이토플라스마 (DAPI 염색), 아닐린 블루(캘로스)
- 주사전자현미경(SEM): 곰팡이, 세균의 표면 입체 구조 관찰
- 투과전자현미경(TEM): 바이러스 입자, 파이토플라스마, 세균 내부 구조 및 부속사 관찰

습식 처리법 (Wet Chamber)
- 대상: 곰팡이
- 방법: 페트리디쉬에 젖은 여과지 + 식물체 놓고 배양하여 곰팡이 발생 유도
- 목적: 병반에서 포자 형성을 유도하여 동정 용이
영양 배지법
- 대상: 곰팡이, 세균
- 방법: 인공 배지(PDA, NA 등)에 병원균을 접종하여 분리, 배양
- 목적: 순수 분리 및 동정

화학적 진단
- Gram 염색: 세균을 그람 양성(보라색)/음성(붉은색)으로 구분하는 핵심 동정법
- 황산구리법: 일부 바이러스(예: 감자 모자이크 바이러스) 감염 조직의 화학 반응 이용
생물학적 진단
- 지표식물(검정식물) 검정: 특정 바이러스에 특이적 반응을 보이는 식물에 접종하여 감염 여부 확인
면역학적 진단 (항원-항체 반응)
- 원리: 항혈청(항체)을 이용해 특정 병원균(항원)을 검출
- 종류:
  1. 응집 반응 / 침강 반응
  2. 면역확산법
  3. IF법 (면역형광법)
  4. ELISA (면역효소 항체법): 가장 널리 쓰임
  5. ISEM (면역전자현미경법)

PCR (중합효소 연쇄반응)
- 원리: 병원체의 특정 DNA/RNA를 대량 증폭하여 검출
- 대상: 바이러스, 세균, 곰팡이, 파이토플라스마 등 거의 모든 병원균에 적용 가능 (고감도, 고특이성)
유전자 염기서열 분석
- 16S rRNA 유전자 분석: 세균, 파이토플라스마 동정에 핵심적인 방법
- ITS 영역 분석: 곰팡이 동정에 주로 사용

현미경:
- DAPI 시약을 이용한 형광현미경 관찰 (체관부에서 형광 발현)
- 아닐린 블루 염색 후 형광현미경 관찰 (캘로스 축적)
- Dienes 염색 후 광학현미경 관찰
- **투과전자현미경(TEM)**으로 형태 직접 확인 (세포벽이 없음)
분자진단:
- PCR (가장 보편적이고 확실한 방법)
- DNA probes, RFLP
- 16S rRNA 유전자 염기서열 분석

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